Oil Red O 染色

Introduction

Oil Red O は無極性の赤い色素である。極性がないため、細胞内の中性脂質に特異的に溶解し、脂肪滴を赤く染色する。

Materials

Protocol

Oil Red O 染色液の調整

  1. Oil Red O 保存液 6 に対し、MQ を 4 加え、よく撹拌後、30 min 静置する。
  2. 上記の溶液を、濾紙で濾過したものを Oil Red O 染色液として使用する。
    濾過に時間がかかるので、余裕をもって Oil Red O 染色液を調整する。
    Oil Red O が析出するため、調整した染色液は2時間以内に使用する。
    同様の理由で、余った染色液は廃液として処理し、再利用しない。

Oil Red O 染色

  1. アスピレーターで培養液を除去する。
  2. PBS(-) で wash, 2回。
  3. 2% PFA を加えて固定する。RT, 10 min。
  4. MQ で wash, 2回。
  5. 60% 2-propanol を加えて脱水。RT, 1 min。
    細胞中に水が残留していると、Oil Red O が析出してしまう。
  6. Oil Red O 染色液を加えて染色。RT, 20 min。
  7. MQ で wash, 2回。
  8. MQ に細胞が浸かっている状態で、顕微鏡で観察・撮影する。