Introduction
Oil Red O は無極性の赤い色素である。極性がないため、細胞内の中性脂質に特異的に溶解し、脂肪滴を赤く染色する。
Materials
- 漏斗 (アズワン, 2-9171-02)
- 濾紙 (アズワン, 2-872-03)
- MQ, 染色用, RT
- PBS(-), 染色用, RT
- 2% PFA in PBS(-), 4°C
- 60% 2-propanol, RT
- Oil Red O 保存液 (300 mg Oil Red O [Wako, 576-33002] in 2-propanol), RT
Protocol
Oil Red O 染色液の調整
- Oil Red O 保存液 6 に対し、MQ を 4 加え、よく撹拌後、30 min 静置する。
- 上記の溶液を、濾紙で濾過したものを Oil Red O 染色液として使用する。
濾過に時間がかかるので、余裕をもって Oil Red O 染色液を調整する。
Oil Red O が析出するため、調整した染色液は２時間以内に使用する。
同様の理由で、余った染色液は廃液として処理し、再利用しない。
Oil Red O 染色
1 ml/3 cm dish or 6-well plate、300 ul/24-well plate。
- アスピレーターで培養液を除去する。
- PBS(-) で wash, 2回。
- 2% PFA を加えて固定する。RT, 10 min。
- MQ で wash, 2回。
- 60% 2-propanol を加えて脱水。RT, 1 min。
細胞中に水が残留していると、Oil Red O が析出してしまう。 - Oil Red O 染色液を加えて染色。RT, 20 min。
細胞の様子を見て染色時間を調節する。 - MQ で wash, 2回。
- MQ に細胞が浸かっている状態で、顕微鏡 (Color, Bright field) で観察・撮影する。
- 必要であれば、Oil Red O の定量を行う。
Examples
Fig 1. 3T3-L1 細胞の Oil Red O 染色 / Oil Red O staining of 3T3-L1 cells