Oil Red O の定量

Introduction

Oil Red O 染色した細胞から Oil Red O を抽出し、吸光度を測定することで濃度を定量する。

Materials

Protocol

Oil Red O の抽出

1 ml/3 cm or 6-well、300 ul/24-well

  1. Oil Red O 染色した細胞から、アスピレーターで MQ を除去する。
  2. Plate/dish のフタをした状態で乾燥, RT, O/N。
  3. 60% 2-propanol で wash, 1回。
    Plate/dish に付着している Oil Red O を除去する。
  4. 4% Triton X-100 in 2-propanol を加える。
  5. 数分静置し、細胞が白くなったことを確認してから、Oil Red O 抽出液を 1.5 ml チューブに移す。
    Oil Red O 抽出液は RT で保存可能。

Oil Red O の定量

三谷研のプレートリーダーで Oil Red O 標準液および抽出液の吸光度を測定し、濃度を定量する。

0 　
3 　
10 　
30 　
75 　
150 　
300 　
600 　
  1. フタなしの 96-well plate (IWAKI, 3881-096) に、上のレイアウトで、200 ul/well の Oil Red O 標準液を加える。
  2. その他の well に、200 ul/well の Oil Red O 抽出液を加える。
  3. 三谷研のプレートリーダー (AMR-100) の側面に USB メモリを挿し、背面の電源を入れる。
  4. 「Protocol」の「File list」から、「OilRedTakaya」を選択し、「Open」する。
  5. プレートリーダー前面の「Plate in/out」ボタンを押し、plate をセットする。
  6. 「Run」を押し、測定を開始する。プロトコルを保存するメッセージが出るので「OK」を押す。
  7. 測定が終了すると、定量された濃度 (Analysis) が表示される。
  8. 「Ex Report」を押し、「Raw data」(吸光度)「Analysis」(濃度) の両方を選択する。
  9. 「Export」を押すと、USB メモリにデータ (.csv) が保存される。
  10. 保存されたメッセージが出たら「OK」を押し、続いて「Back」を押して前の画面に戻る。
  11. 「Plate in/out」ボタンを押し、plate を回収する。
  12. 背面の電源を切る。