新規 GATA4 結合タンパク質 RACK1 の心肥大に対する効果の検討

新規 GATA4 結合タンパク質 RACK1 の心肥大に対する効果の検討

鈴木秀敏1, 砂川陽一1,2,3, 岡村信子1, 中川由紀子1, 杉本明央1, 寺田太士1, 高谷智英3, 刀坂泰史1, 藤田正俊2, 島津章3, 長谷川浩二3, 森本達也1.

  1. 静岡県立大学薬学部.
  2. 京都大学医学部.
  3. 国立病院機構京都医療センター.

第131回日本薬学会年会 (静岡), 2011/03/30 (中止).

Abstract

【目的】私たちは心筋細胞の核内情報伝達経路を検討し、Histone Acetyl Transferase (HAT) 活性をもつ p300 が心筋特異的転写因子 GATA4 を活性化して心筋細胞肥大を亢進することを見出した。p300/GATA4 経路の詳細な制御メカニズムの解明のために GATA4 コンプレックスを精製し、プロテオミクス解析により、ユビキチン-プロテアソームシステムに関与する RACK1 (Recepter for activated protein kinase C1) が精製された。本研究の目的は RACK1 の心筋細胞肥大における役割を検討することである。

【方法・結果】大腸菌を用いて RACK1 リビナントタンパクを作成し、RACK1 と GATA4 の結合を調べた。RACK1 の部分タンパクを作製、GATA4 結合ドメインを調べた。HEK293 細胞に RACK1 および GATA4 発現ベクターをトランスフェクションし、核タンパクを抽出後、免疫沈降-Western Blotting 法により結合を調べた。HEK293 細胞においてGATA4、p300、RACK1 発現ベクターをトランスフェクションし、心肥大反応遺伝子 ET-1 プロモーターの転写活性を測定した結果、GATA4 と p300 により ET-1 プロモーターの転写活性は相乗的に亢進するが、RACK1 は用量依存的にこの亢進を抑制した。ラット初代培養心筋細胞に RACK1 をトランスフェクションしフェニレフリン (PE) で刺激を加え、ET-1 の転写活性測定と β-MHC 抗体で免疫染色を行い細胞面積測定をした結果、PE による ET-1 の転写活性の亢進ならびに細胞面積の増加を RACK1 は有意に抑制した。

【考察】以上から、RACK1 は心肥大を制御する p300/GATA4 経路に作用し、心筋細胞の肥大を抑制することを見出した。以上より RACK1 が心不全治療のターゲットとなる可能性が示された。