Introduction
アルシアンブルー (Alcian blue) は、酸性ムコ多糖の硫酸基とカルボキシル基に特異的に結合する青い色素である。pH 2.5 では硫酸基とカルボキシル基の両方、pH 1.0 以下では硫酸基のみと結合する。軟骨細胞基質には酸性ムコ多糖類 (コンドロイチン硫酸やヒアルロン酸) が多く含まれるため、軟骨分化の指標として Alcian blue 染色が用いられる。
Materials
- MQ, 染色用, RT
- 2% PFA in PBS(-), 4°C
- 1% 酢酸, RT
- Alcian blue 液 (1% Alcian blue 8GX, 3% 酢酸, pH 2.5) (Fujifilem Wako, 013-13801), RT
Protocol
1 ml/3 cm dish、500 ul/24-well。
- PBS(-) で wash, 2回。
- 2% PFA を加えて固定する。RT, 30 min。
- MQ で wash, 2回。
- Alcian blue 液を加え、アルミホイルで遮光してインキュベーション。RT, O/N。
- 1% 酢酸 で wash, 3回。
- MQ で wash, 2回。
- MQ に細胞が浸かっている状態で、顕微鏡 (Color) で観察・撮影する。
定量用に Bright field 4倍、写真用に Phase 10倍。