培養液の調製

目次 / Index

各試薬の情報は「商品コード一覧: 細胞培養」を参照。

特に注がない限り、DMEM は DMEM-HG を用いる。

調整した培養液には「組成」「日付」「名前」を記入したテープを貼る。下記の培養液の見出しの色は、テープの色と対応している (50 ml チューブに作成する場合などは除く)。

汎用培地 / Universal medium

初代培養細胞 / For primary-cultured cell

細胞株 / For cell line

多能性幹細胞 / For pluripotent stem cell

DMEM/10% FBS/PS

組成: DMEM/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

RPMI 1640/10% FBS/PS

組成: RPMI 1640/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
RPMI 1640 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

hMB-GM: ヒト筋芽細胞増殖培地 / Growth medium for human myoblasts

SkGM-2 Skeletal Muscle Cell Growth Medium-2 BulletKit (LONZA, CC-3245) を用いる。

含有成分: 10% FBS, 2% L-Glu, 0.1% EGF, 0.1% DEX, 30 ug/ml gentamicin, 15 ng/ml AmpB

hMB-DM: ヒト筋芽細胞分化培地 / Differentiation medium for human myoblasts

組成: DMEM/2% HS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 49 ml - 4°C
HS 1 ml 2% -20°C
PS 0.5 ml 1% -20°C

mMB-GM: マウス筋芽細胞増殖培地 / Growth medium for murine myoblasts

組成: Ham's F-10/20% FBS/bFGF/PS

成分 容量 終濃度 保存
Ham's F-10 400 ml - 4°C
FBS 100 ml 20% -20°C
50 ug/ml bFGF 20 ul 2 ng/ml -80°C
PS 5 ml 1% -20°C

mMB-DM: マウス筋芽細胞分化培地 / Differentiation medium for murine myoblasts

組成: DMEM/5% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 47.5 ml - 4°C
FBS 2.5 ml 5% -20°C
PS 0.5 ml 1% -20°C

chMB-GM: ニワトリ筋芽細胞増殖培地 / Growth medium for chick myoblasts

組成: RPMI 1640/20% FBS/NEAA/CEE/bFGF/PS (Takaya 2017)

成分 容量 終濃度 保存
RPMI 1640 400 ml - 4°C
FBS 100 ml 20% -20°C
NEAA 5 ml 1% -20°C
CEE 5 ml 1% -80°C
50 ug/ml bFGF 20 ul 2 ng/ml -80°C
PS 5 ml 1% -20°C

chMB-DM: ニワトリ筋芽細胞分化培地 / Differentiation medium for chick myoblasts

組成: DMEM/2% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 49 ml - 4°C
FBS 1 ml 2% -20°C
PS 0.5 ml 1% -20°C

hSMC-GM: ヒト平滑筋細胞増殖培地 / Growth medium for human smooth muscle cells

Smooth Muscle Cell Media 2 Kit (PromoCell, C-22162) を用いる。

含有成分: 5% FCS, 0.5 ng/ml EGF, 2 ng/ml bFGF, 5 ug/ml insulin, PS

Kit には PS が付属していないので調整時に加える。

hSMC-DM: ヒト平滑筋細胞分化培地 / Differentiation medium for human smooth muscle cells

組成: DMEM/1% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 49 ml - 4°C
FBS 0.5 ml 1% -20°C
PS 0.5 ml 1% -20°C

hSMC-MM: ヒト平滑筋細胞石灰化培地 / Mineralization medium for human smooth muscle cells

組成: DMEM/15% FBS/Pi/AA/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 85 ml - 4°C
FBS 15 ml 15% -20°C
Phosphoric acid (H3PO4) 17.4 ul 3 mM RT
5 mg/ml ascorbic acid ×1/1000
~ ×1/100
5 ug/ml
~ 50 ug/ml
4°C
Stock -20°C
PS 1 ml 1% -20°C

DMEM-LG+Man: 低血糖基礎培地 / Basal medium with low glucose

組成: DMEM-LG/mannitol

DMEM-LG (5.56 mM glucose) の浸透圧を DMEM-HG (25 mM glucose) と等しくするため、DMEM-LG に mannitol を加える。

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-LG 500 ml - 4°C
Mannitol 1.77 g 19.4 mM RT

Protocol

  1. 500 ml ビーカーに DMEM-LG を入れる。
  2. スターラーで撹拌しながら、1.77 g の mannitol を加える。
  3. 以下の作業を安全キャビネット内で行う。
  4. ボトルトップフィルターに 0.22 um のフィルターメンブレンを装着する。
  5. ボトルトップフィルターを 500 ml のメディウム瓶にセットする。
  6. ボトルトップフィルターに 500 ml の DMEM-LG+Man を入れる。
  7. アスピレーターで脱気し、DMEM-LG+Man をメディウム瓶にフィルター滅菌する。
  8. 4°C 保存。

C2-GM-LG: C2C12 細胞低血糖増殖培地 / Growth medium with low glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-LG/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-LG+Man 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

C2-GM-HG: C2C12 細胞高血糖増殖培地 / Growth medium with high glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-HG/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-HG 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

C2-DM-LG: C2C12 細胞低血糖分化培地 / Differentiation medium with low glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-LG/2% HS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-LG+Man 49 ml - 4°C
HS 1 ml 2% -20°C
PS 500 ul 1% -20°C

C2-DM-HG: C2C12 細胞高血糖分化培地 / Differentiation medium with high glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-HG/2% HS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-HG 49 ml - 4°C
HS 1 ml 2% -20°C
PS 500 ul 1% -20°C

L1-GM: 3T3-L1 細胞増殖培地 / Growth medium for 3T3-L1 preadipocytes

組成: DMEM-LG/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-LG 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

L1-DM: 3T3-L1 細胞分化培地 / Differentiation medium for 3T3-L1 preadipocytes

L1-DM(-) @ day -2

組成: DMEM-HG/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-HG 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

L1-DM+DEX/IBMX/INS @ day 0

組成: L1-DM/DEX/IBMX/INS

成分 容量 終濃度 保存
L1-DM(-) - 4°C
1 mM DEX ×1/1000 1 uM -20°C
50 mM IBMX ×1/100 0.5 mM -20°C
1 mg/ml insulin ×1/100 10 ug/ml 4°C

L1-DM+INS @ day 2~

組成: L1-DM/INS

成分 容量 終濃度 保存
L1-DM(-) - 4°C
1 mg/ml insulin ×1/100 10 ug/ml 4°C

OB-GM: 骨芽細胞増殖培地 / Growth medium for MC3T3-E1 osteoblasts

組成: EMEM/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
EMEM 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

OB-DM: 骨芽細胞分化培地 / Differentiation medium for MC3T3-E1 osteoblasts

組成: EMEM/10% FBS/DEX/β-GP/AA/PS

成分 容量 終濃度 保存
OB-GM - 4°C
10 uM DEX * ×1/1000 10 nM -
1 M β-glycerophosphate ×1/100 10 mM 4°C
Stock -20°C
5 mg/ml ascorbic acid ×1/1000
~ ×1/100
5 ug/ml
~ 50 ug/ml
4°C
Stock -20°C

* 10 uM DEX は 1 mM DEX を培地で 1/100 に希釈したものを用いる。

mES-GM-LIF(-): マウス ES/iPS 細胞基礎培地 / Basal medium for murine ESCs/iPSCs

組成: DMEM/15% FBS/NEAA/Nucleosides/2-ME/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 425 ml - 4°C
FBS 75 ml 15% -20°C
NEAA 5 ml 1% -20°C
Nucleosides 5 ml 1% -20°C
0.1 M 2-ME 500 ul 0.1 mM 4°C
PS 5 ml 1% -20°C

mES-GM-LIF(+): マウス ES/iPS 細胞増殖培地 / Growth medium for murine ESCs/iPSCs

組成: mES-GM/LIF/CHIR/PD

成分 容量 終濃度 保存
mES-GM-LIF(-) 50 ml - 4°C
106 units/ml LIF 50 ul 103 units/ml 4°C
10 mM CHIR99021 15 ul 3 uM -20°C
10 mM PD0325901 4 ul 0.8 uM -20°C

mES-DM: マウス ES/iPS 細胞分化培地 / Differentiation medium for murine ESCs/iPSCs

組成: DMEM/10% FBS/5% HS/NEAA/2-ME/PS (Mizuno 2010)

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 425 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
HS 25 ml 5% -20°C
NEAA 5 ml 1% -20°C
0.1 M 2-ME 500 ul 0.1 mM 4°C
PS 5 ml 1% -20°C

参考文献 / References

Mizuno Y, Chang H, Umeda K, Niwa A, Iwasa T, Awaya T, Fukada S, Yamamoto H, Yamanaka S, Nakahata T, Heike T. Generation of skeletal muscle stem/progenitor cells from murine induced pluripotent stem cells. FASEB J. 2010; 24: 2245-2253.

Nihashi Y, Ono T, Kagami H, Takaya T*. Toll-like receptor ligand-dependent inflammatory responses in chick skeletal muscle myoblasts. Dev Comp Immunol. 2019; 91: 115-122.

Nihashi Y, Umezawa K, Shinji S, Hamaguchi Y, Kobayashi H, Kono T, Ono T, Kagami H, Takaya T*. Distinct cell proliferation, myogenic differentiation, and gene expression in skeletal muscle myoblasts of layer and broiler chickens. Sci Rep. 2019; 9: 16527.

Shinji S, Nakamura S, Nihashi Y, Umezawa K, Takaya T*. Berberine and palmatine inhibit the growth of human rhabdomyosarcoma cells. Biosci Biotechnol Biochem. 2020; 84: 63-75.

Takaya T*, Nihashi Y, Kojima S, Ono T, Kagami H. Autonomous xenogenic cell fusion of murine and chick skeletal muscle myoblasts. Anim Sci J. 2017; 88: 1880-1885.