培養液の調製

目次 / Index

各試薬の情報は「商品コード一覧: 細胞培養」を参照。

調整した培養液には「組成」「日付」「名前」を記入したテープを貼る。下記の培養液の見出しの色は、テープの色と対応している (50 ml チューブに作成する場合などは除く)。

DMEM/10% FBS/PS: 汎用培地 / Universal medium

組成: DMEM/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

mMB-GM: マウス筋芽細胞増殖培地 / Growth medium for murine myoblasts

組成: Ham's F-10/20% FBS/bFGF/PS

成分 容量 終濃度 保存
Ham's F-10 400 ml - 4°C
FBS 100 ml 20% -20°C
50 ug/ml bFGF 20 ul 2 ng/ml -80°C
PS 5 ml 1% -20°C

mMB-DM: マウス筋芽細胞分化培地 / Differentiation medium for murine myoblasts

組成: DMEM/5% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM/10% FBS/PS 25 ml FBS 5% 4°C
DMEM 25 ml - 4°C

chMB-GM: ニワトリ筋芽細胞増殖培地 / Growth medium for chick myoblasts

組成: RPMI 1640/20% FBS/NEAA/CEE/bFGF/PS (Takaya 2017)

成分 容量 終濃度 保存
RPMI 1640 400 ml - 4°C
FBS 100 ml 20% -20°C
NEAA 5 ml 1% -20°C
CEE 5 ml 1% -80°C
50 ug/ml bFGF 20 ul 2 ng/ml -80°C
PS 5 ml 1% -20°C

chMB-DM: ニワトリ筋芽細胞分化培地 / Differentiation medium for chick myoblasts

組成: DMEM/2% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM/10% FBS/PS 10 ml FBS 2% 4°C
DMEM 40 ml - 4°C

DMEM-LG+Man: 低血糖基礎培地 / Basal medium with low glucose

組成: DMEM-LG/Mannitol

DMEM-LG (glucose 5.56 mM) の浸透圧を DMEM-HG (glucose 25 mM) と等しくするため、DMEM-LG にマンニトールを加える。

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-LG 500 ml - 4°C
Mannitol 1.77 g 19.4 mM RT

Protocol

  1. 500 ml ビーカーに DMEM-LG を入れる。
  2. スターラーで撹拌しながら、1.77 g の Mannitol を加える。
  3. 以下の作業を安全キャビネット内で行う。
  4. ボトルトップフィルターに 0.22 um のフィルターメンブレンを装着する。
  5. ボトルトップフィルターを 500 ml のメディウム瓶にセットする。
  6. ボトルトップフィルターに 500 ml の DMEM-LG+Man を入れる。
  7. アスピレーターで脱気し、DMEM-LG+Man をメディウム瓶にフィルター滅菌する。
  8. 4°C 保存。

C2-GM-LG: C2C12 細胞低血糖増殖培地 / Growth medium with low glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-LG/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-LG+Man 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

C2-GM-HG: C2C12 細胞高血糖増殖培地 / Growth medium with high glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-HG/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-HG 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

C2-DM-LG: C2C12 細胞低血糖分化培地 / Differentiation medium with low glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-LG/2% HS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-LG+Man 49 ml - 4°C
HS 1 ml 2% -20°C
PS 500 ul 1% -20°C

C2-DM-HG: C2C12 細胞高血糖分化培地 / Differentiation medium with high glucose for C2C12 myoblasts

組成: DMEM-HG/2% HS/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM-HG 49 ml - 4°C
HS 1 ml 2% -20°C
PS 500 ul 1% -20°C

RPMI 1640/10% FBS/PS: 横紋筋肉腫細胞培地 / Medium for RMS cells

組成: RPMI 1640/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
RPMI 1640 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

OB-GM: 骨芽細胞増殖培地 / Growth medium for osteoblasts

組成: EMEM/10% FBS/PS

成分 容量 終濃度 保存
EMEM 450 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
PS 5 ml 1% -20°C

OB-DM: 骨芽細胞分化培地 / Differentiation medium for osteoblasts

組成: EMEM/10% FBS/AA/PS

成分 容量 終濃度 保存
OB-GM 50 ml - 4°C
5 mg/ml ascorbic acid 500 ul 50 ug/ml 4°C
Stock -20°C

mES-GM-LIF(-): マウス ES/iPS 細胞基礎培地 / Basal medium for murine ESCs/iPSCs

組成: DMEM/15% FBS/NEAA/Nucleosides/2-ME/PS

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 425 ml - 4°C
FBS 75 ml 15% -20°C
NEAA 5 ml 1% -20°C
Nucleosides 5 ml 1% -20°C
0.1 M 2-ME 500 ul 0.1 mM 4°C
PS 5 ml 1% -20°C

mES-GM-LIF(+): マウス ES/iPS 細胞増殖培地 / Growth medium for murine ESCs/iPSCs

組成: mES-GM/LIF/CHIR/PD

成分 容量 終濃度 保存
mES-GM-LIF(-) 50 ml - 4°C
106 units/ml LIF 50 ul 103 units/ml 4°C
10 mM CHIR99021 15 ul 3 uM -20°C
10 mM PD0325901 4 ul 0.8 uM -20°C

mES-DM: マウス ES/iPS 細胞分化培地 / Differentiation medium for murine ESCs/iPSCs

組成: DMEM/10% FBS/5% HS/NEAA/2-ME/PS (Mizuno 2010)

成分 容量 終濃度 保存
DMEM 425 ml - 4°C
FBS 50 ml 10% -20°C
HS 25 ml 5% -20°C
NEAA 5 ml 1% -20°C
0.1 M 2-ME 500 ul 0.1 mM 4°C
PS 5 ml 1% -20°C

References

Mizuno Y, Chang H, Umeda K, Niwa A, Iwasa T, Awaya T, Fukada S, Yamamoto H, Yamanaka S, Nakahata T, Heike T. Generation of skeletal muscle stem/progenitor cells from murine induced pluripotent stem cells. FASEB J. 2010; 24: 2245-2253.

Takaya T*, Nihashi Y, Kojima S, Ono T, Kagami H. Autonomous xenogenic cell fusion of murine and chick skeletal muscle myoblasts. Anim Sci J. 2017; 88: 1880-1885.