Materials
- 凍結保存した細胞
- DMEM/10% FBS/PS, 4°C
- 解凍する細胞の培養に適切な培地, 4°C
Protocol
- 作業の前に、凍結細胞のデータシートを確認・更新する。
- 凍結細胞は急速に解凍する。細胞が凍結保存液に暴露される時間をできるだけ短くする。
- 15 mlチューブに 5 ml の DMEM/10% FBS/PS を入れ、37°C のインキュベータで充分に温めておく。
- -80°C のフリーザから凍結細胞のクライオチューブを取り出す。
- クライオチューブに、温めておいた DMEM/10% FBS/PS を ~1 ml 加える。
- ピペッティングで凍結した保存液を溶かしていく。チップの先で凍結片を削らない。
- ある程度溶解したら 15 ml チューブに移し、再び 1 ml の DMEM/10% FBS/PS を加えて懸濁する。
- 4-5 を繰り返して保存液を完全に溶解し、全量を 15 ml チューブに移す。
- 遠心, 1500 rpm, RT, 3 min。
- アスピレーターで上清を除去する。
- 適切な培地で懸濁し、ディッシュに播種する。