Materials
- RNA サンプル, -80°C
- 5× RT Master Mix (ReverTra Ace qPCR RT Master Mix, TOYOBO, FSQ-201), -20°C
Protocol
- 実験ノートに以下の表を記載する。
| サンプル名 | conc (ug/ul) | 1 ug (ul) | MQ (to 8 ul) | RT Mix | Total |
|---|---|---|---|---|---|
| サンプル X | x | 1/x | 8 - 1/x | 2 ul | 10 ul |
| サンプル A | 0.85 | 1.18 | 6.82 | 2 ul | 10 ul |
| サンプル B | 1.07 | 0.93 | 7.07 | 2 ul | 10 ul |
- PCR チューブに MQ を入れる。
- RNA を加える。
- 2 ul の 5× RT Master Mix を加える。
- タッピングしてよく混合した後、スピンダウンする。
- 以下の設定でサーマルサイクラーにかける。
| 温度 | 時間 |
|---|---|
| 37°C | 15 min |
| 50°C | 5 min |
| 98°C | 5 min |
| 4°C | ∞ |
- スピンダウンした cDNA 溶液を 1.5 ml チューブに移す。
- 90 ul の MQ を加えて 10 倍希釈する。
- -20°C 保存。