Introduction
Sirius red は、スルホン酸基を介してコラーゲン分子の塩基性基と反応することでコラーゲン線維を赤く染色する。
Materials
- PBS(-), 染色用, RT
- 2% PFA in PBS(-), 4°C
- Sirius red 染色液, RT
- 1% 酢酸, RT
Sirius red 染色液の調整
| 成分 | 容量 | 終濃度 | 保存 |
|---|---|---|---|
| MQ | 200 ml | - | - |
| ピクリン酸飽和液 (ワンギーソン液) Wako 224-01405 |
2.6 ml | 1.3% | RT |
| Direct red 80 Thermo B21693 |
0.2 g | 0.1% | RT |
Protocol
1 ml/3 cm dish、500 ul/24-well。
- PBS(-) で wash, 2回。
- 2% PFA を加えて固定する。RT, 30 min。
- MQ で wash, 2回。
- Sirius red 染色液を加え、アルミホイルで遮光してインキュベーション。RT, O/N。
- 1% 酢酸 で wash, 3回。
- MQ で wash, 2回。
- MQ に細胞が浸かっている状態で、顕微鏡 (Color, Bright field or Phase) で観察・撮影する。
定量用に Bright field 4倍、写真用に Phase 10倍。