Introduction
Hoechst 33342 は二重鎖 DNA と結合して青色蛍光を発する。DAPI と違い、Hoechst は細胞浸透性があるので、生細胞の核を染色することができる。
Materials
- 10 mg/ml Hoechst stock (Hoechst 33342 [SIGMA, B2261] in MQ), -20°C
- PBS(-), 4°C
Protocol
- Hoechst stock を PBS(-) で 1/2000 (5 ug/ml) に希釈し、Hoechst 染色液を調整する。
Hoechst 染色液は毎回使用時に調整する。
Hoechst stock を培養液で希釈しない。蛍光が大幅に弱まる。 - アスピレーターで dish の培養液を除去する。
- Hoechst 染色液を dish に加える。
- CO2 インキュベーション, 37°C, 10 min。
- アスピレーターで Hoechst 染色液を除去する。
- PBS(-) で wash, 3回。
- PBS(-) に細胞が浸かっている状態で蛍光観察する。